Сравнительное исследование Allergy Explorer (ALEX) и платформ ImmunoCAP

Ш. Нерелиус1, М. Андерссон1, Л. Сегаард2,
М. Шванбек1, С. Кофлер3, М. Бертольд4

1 Thermo Fisher Scientific, Phadia AB, Рапсгатан 7P, P.O. а/я 6460, 751 37 Упсала, Швеция

2 Thermo Fisher Scientific, компания Thermo Fisher Diagnostics ApS, ЦБР № 27640745, Гидеванг 33, 3450 Аллерод, Дания

3 Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Diagnostics Austria GmbH, Дрезднер штрассе 89, 1200 Вена, Австрия

4 Cyxone AB, Адельгатан 21, 211 22 Мальмё, Швеция

РЕЗЮМЕ. Цель. В данной работе проводилось сравнение результатов нового мультиплекс-теста ALEX с результатами, полученными на мультиплекс-платформе ImmunoCAP ISAC sIgE 112 и при постановке единичных тестов ImmunoCAP.

Материалы и методы. Для анализа сывороток 64–66 пациентов на трех платформах использовались 11 цельных экстрактов аллергенов и соответствующих аллергенных компонентов.

Результаты. При исследовании на специфические IgE с цельными аллергенами 55% результатов, полученных с помощью теста ALEX, были ложноотрицательными по сравнению с ImmunoCAP, в то время как для компонентов аллергенов ALEX продемонстрировал 33% ложноотрицательных результатов по сравнению с результатами тестов ImmunoCAP. Кроме того, тест ALEX характеризуется более низким динамическим диапазоном – на платформе не было получено результатов выше 36 kUA /L для соответствующих образцов с уровнем >=100 kUA/L в тестах ImmunoCAP при анализе IgE-ответа на цельные аллергены. В случае IgE-ответа на аллергенные компоненты ALEX не показал результатов выше 38 kUA/L для образцов с уровнем 150 kUA/L в тестах ImmunoCAP. По сравнению с единичными ImmunoCAP-тестами ALEX продемонстрировал низкий динамический диапазон и слабую согласованность количественных результатов для общего и специфических IgE как для цельных аллергенов, так и для компонентов. При сравнении с платформой ImmunoCAP ISAC sIgE 112 согласованность была лучше, однако чувствительность и динамический диапазон теста ALEX все равно оставались на низком уровне.

Выводы. Тест ALEX имеет ряд серьезных ограничений производительности по сравнению с обоими типами платформ ImmunoCAP.

Ключевые слова: sIgE, tIgE, тесты на основе чипов, ImmunoCAP, ALEX

Для цитирования: Ш. Нерелиус, М. Андерссон, Л. Сегаард, М. Шванбек, С. Кофлер, М. Бертольд. Сравнительное исследование Allergy Explorer (ALEX) и платформ ImmunoCAP. Российский Аллергологический Журнал.
2020;17(1):66-75. DOI: 10.36691/RAJ.2020.17.1.007

Введение

Чип ALEX® – это многокомпонентный тест, позволяющий одновременно измерять общий IgE (tlgE) и специфические lgE (sIgE) к экстрактам аллергенов и аллергокомпонентам в одном исследовании. В общей сложности измеряется 282 аналита, из них 156 экстрактов и 125 компонентов, а также общий IgE. При сравнении с ImmunoCAP TM ISAC 112 81 аллергокомпонент перекрывается, 44 есть только в тесте ALEX, в то время как 31 присутствует только в тесте ImmunoCAP ISAC. Производитель теста ALEX утверждает, что тест предоставляет полуколичественные результаты для tIgE до 2500 kU/L, для sIgE к экстрактам аллергенов и аллергокомпонентам указываются количественные результаты в диапазоне до 50 kUA/L [1].

Все однокомпонентные тесты ImmunoCAP – общий IgE, экстракты аллергенов и аллергокомпоненты – выдают количественные результаты, соотносящиеся со стандартом ВОЗ [2, 3]. Многокомпонентный тест ImmunoCAP ISAC содержит 112 аллергокомпонентов и генерирует полуко- личественные результаты (стандартизированные единицы ISAC/ISU) [4].

Цель

Целью была оценка технической производительности теста ALEX в измерении общего IgE, специфических IgE к цельным экстрактам аллергенов и аллергокомпонентам в сравнении с результатами однокомпонентных тестов ImmunoCAP (общий IgE, sIgE) и многокомпонентной платформы ImmunoCAP ISAC sIgE 112.

Дизайн эксперимента и методы

Основываясь на доказанной клинической зна- чимости и представленности на платформах ALEX и ImmunoCAP, для исследования были отобраны одиннадцать цельных аллергенов и соответствующих аллергокомпонентов из разных групп (сезонные/кру- глогодичные ингаляторные аллергены, пищевые аллергены животного и растительного происхождения).

Образцы, полученные из Отдела диагностических образцов Phadia AB, отбирались на основе заведомо известного положительного sIgE-ответа на выбранные цельные аллергены и соответствующие компоненты, представленные в микрочипе. Для исследования были взяты образцы с положительным ответом на несколько экстрактов и уровнями sIgE в диапазоне от 0,35 до 50 kUA/L.

В общей сложности было проанализировано 64–66 образцов сыворотки с помощью теста ALEX, тестов ImmunoCAP для определения специфическо- го IgE к цельным аллергенам, теста ImmunoCAP для определения общего IgE и теста для определения специфических sIgE к 112 аллергокомпонентам на чипе ImmunoCAP ISAC. 19–50 образцов также исследовали с помощью тестов ImmunoCAP для определения специфического IgE к аллергоком- понентам (n=25), соответствующим выбранным цельным аллергенам (табл. 1).

Все исследования были проведены согласно инструкциям каждого производителя профессиональными лабораторными работниками. Тесты ALEX проводились в Сервисной лаборатории Thermo Fisher Scientific (Аллерёд, Дания), все остальные тесты – в R&D отделе в Упсале (Швеция).

Таблица 1. Список отобранных цельных аллергенов и аллергокомпонентов, проанализированных на каждой платформе. Полные названия продуктов ImmunoCAP приведены в конце документа

Цельные экстракты аллергенов (n=11) Соответствующие компоненты, общие для теста
ALEX и аллергенов ImmunoCAP(n=25)
Компоненты, общие для ALEX
и теста ISAC sIgE 112 (n=26)
Клещ домашней пыли Der p 1, Der p 2, Der p 10, Der p 23 Der p 1, Der p 2, Der p 10, Der f 1, Der f 2
Пшеница Глиадин
Персик Pru p 3 Pru p 3
Пыльцаоливы  Ole e 1 Ole e 1
Тимофеевка  Phl p 1, Phl p 2, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 12 Phl p 1, Phl p 2, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 12
Постенница  Par j 2 Par j 2
Яйцо Gal d 1, Gal d 2, Gal d 3 Gal d 1, Gal d 2, Gal d 3, Gal d 5
Молоко  Bos d 4, Bos d 5, Bos d 8 Bos d 4, Bos d 5, Bos d 8
Лесной орех  Cor a 1, Cor a 8, Cor a 9, Cor a 14 Cor a 1,Cor a 8, Cor a 9
Грецкий орех Jug r 1 Jug r 1, Jug r 2

Статистический анализ

Согласованность между разными тест-си- стемами оценивалась на образцах, для которых было получено не менее шести положительных результатов как в ALEX, так и в ImmunoCAP. Для сравнения методов использовалась процедура сравнения Пассинга–Баблока [5] с применением последующего линейного регрессионного анализа. Анализ проводился отдельно для каждого аллергена в диапазоне измерений, соответствующем тесту ALEX (0,3–50 kUA/L для sIgE; 1–2500 kU/l для общего IgE), согласно инструкции производителя. Рассчитывались общая положительная и отрица-тельная согласованность, а также согласованность в пределах классов, соответствующих классам для теста ALEX.

Результаты

Общий IgE

Уровни общего IgE в тесте ImmunoCAP для об- разцов сыворотки (n=65) находились в диапазоне между 7 и 7900 kU/L, в то время как результаты теста ALEX укладывались в диапазон между 12 и 654 kU/L. Корреляция между тестами ALEX и ImmunoCAP выше 500 kU/L была слабой. Согласно информации производителя, измерительный диапазон теста ALEX – 1–2500 kU/L, результаты полуколичественные [1]. Тест ImmunoCAP на общий IgE выдает количественные результаты [2] (рис. 1).

Рис. 1. Корреляция между результатами общего IgE для тестов ALEX и ImmunoCAP, демонстрирующая точечные данные в диапазоне до 2500 kU/L (n=58) для ImmunoCAP. Семь точек для результатов свыше 2500 kU/L, полученных на ImmunoCAP, не включены в анализ. Регрессионная кривая отмечена красным

Экстракты аллергенов: ALEX и Цельные Аллергены ImmunoCAP

Согласованность по классам

Согласно информации производителей, как тест ALEX, так и тесты ImmunoCAP для специфического IgE генерируют количественные результаты [1, 3]. Тем не менее для более легкого сравнения резуль- татов во всем диапазоне измерений результаты для экстрактов аллергенов были трансформированы в классы, которые указаны для ALEX (табл. 2, рис. 2). Согласованность данных теста ALEX с данными тестов ImmunoCAP рассчитывалась соответствен- но этим классам. Корреляции для всех результатов приведены на рис. 3 а, b. 

Таблица 2. Абсолютная согласованность результатов теста ALEX и результатов теста ImmunoCAP в рамках классов, указанных для ALEX.
Общая согласованность классов составила 53%

 Класс
(определение ALEX)
Согласованность
(ALEX и ImmunoCAP)
0 (<0,3 kU/l) 99,7%
1 (0,3–1 kU/l) 4,0%
2 (1–5 kU/l) 16,2%
3 (5–15 kU/l) 23,4%
4 (>15 kU/l) 38,8%

Рис. 2. Тепловая карта результатов теста ALEX и результатов теста ImmunoCAP. Частота ложноотрицательных резуль- татов, определенная как <0,3 kUA/L в тесте ALEX и как 0,3 kU /L в тестах ImmunoCAP, была на уровне 55% (234/423 положительных результата ImmunoCAP) для теста ALEX. Ложноотрицательные результаты обнаруживались во всем измерительном диапазоне

Рис. 3 a. Корреляция результатов всех тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE для цельных аллергенов (n=709 точечных данных). Образцы с уровнем до 203 kUA/L sIgE, согласно результатам теста ImmunoCAP sIgE, генерировали результаты до 36 kUA/L в тесте ALEX

Рис. 3 b. Увеличение затененной области графика на рис. 3 а

Рис. 4 a. Корреляция результатов тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE в kUA/L к D. pteronyssinus. Полный набор данных изображен в виде логарифмической диаграммы разброса данных

Рис. 4 c. Корреляция результатов тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE в kUA/L к тимофеевке. Полный набор данных изображен в виде логарифмической диаграммы разброса данных

Рис. 4 b. Корреляция результатов тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE в kUA/L к D. pteronyssinus. Представлены корреляции точечных данных, положительные для обеих систем, находящиеся в рамках измерительного диапазона теста ALEX 0,3–50 kUA/L (регрессионная кривая красного цвета). 39 образцов для D. pteronyssinus (клещ до- машней пыли, d 1) из общего количества в 65 образцов были положительны в тестах ImmunoCAP на специфический IgE (0,3 kU /L). В тесте ALEX количество положительных образцов составило 31

Рис. 4 d. Корреляция результатов тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE в kUA/L к тимофеевке. Представлены корреляции точечных данных, положительные для обеих систем, находящиеся в рамках измерительного диапазона теста ALEX 0,3–50 kUA/L (регрессионная кривая красного цвета). 47 образцов для тимофеевки из общего количества в 65 образцов были положительны в тестах ImmunoCAP на специфический IgE (0,3 kU /L). В тесте ALEX количество положительных образцов составило 25

Количественные сравнения

Мы также проанализировали количественные корреляции результатов отдельных тестов на экстракты аллергенов. На рис. 4 и 5 показано по два примера каждого экстракта аллергенов с хорошей или плохой согласованностью соответственно при сравнении результатов теста ALEX с результатами тестов ImmunoCAP на специфический IgE к цельным аллергенам. Результаты тестов ImmunoCAP были оценены как положительные, поскольку превышали порог, заданный для теста ALEX, то есть 0,3 kU /L. Важно отметить, что количество положительных результатов для тестов ImmunoCAP могло быть выше в случае включения результатов от 0,1 kUA/L (отражая LoQ для тестов ImmunoCAP на специфический IgE).

Рис. 5 a. Корреляция результатов тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE к цельным аллергенам в kUA/L для экстрактов лесного ореха. Полный набор данных изображен в виде логарифмической диаграммы разброса данных

Рис. 5 c. Корреляция результатов тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE к цельным аллергенам в kUA/L для экстрактов пыльцы оливы. Полный набор данных изображен в виде логарифмической диаграммы разброса данных

Рис. 5 b. Корреляция результатов тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE к цельным аллергенам в kUA/L для экстрактов лесного ореха. Представлены корреляции точечных данных, положительные для обеих систем и находящиеся в рамках измерительного диапазона теста ALEX 0,3–50 kUA/L (регрессионная кривая красного цвета). 42 образца для лесного ореха из общего количества в 64 образца были положительными в тестах ImmunoCAP на специфический IgE (0,3 kU /L). Для результатов теста ALEX те же экстракты дали 17 положительных ответов

Рис. 5 d. Корреляция результатов тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE к цельным аллергенам в kUA/L для экстрактов пыльцы оливы. Представлены корреляции точечных данных, положительные для обеих систем и находящиеся в рамках измерительного диапазона теста ALEX 0,3–50 kUA/L (регрессионная кривая красного цвета). 41 образец для оливы из общего количества в 64 образца были положительными в тестах ImmunoCAP на специфический IgE (0,3 kU /L). Для результатов теста ALEX те же экстракты дали 13 положительных ответов

Компоненты аллергенов: ALEX и Аллергокомпоненты ImmunoCAP

Общую согласованность результатов по уровню sIgE к компонентам аллергенов в тесте ALEX и тестах ImmunoCAP анализировали путем результатов в «классах ALEX». Был проведен анализ двадцати пяти компонентов из 11 выбранных экстрактов аллергенов с использованием 19–50 образцов сыворотки на каждый компонент (см. табл. 1). Согласованность между данными теста ALEX и данными теста ImmunoCAP рассчитывалась в рамках каждого класса (табл. 3, рис. 6).

Поскольку производитель теста ALEX указывает, что тест выдает количественные результаты [1], были также посчитаны корреляции между результатами (в kUA/L) для тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE к отдельным компонентам аллергенов. Для четырех компонентов, а именно Cor a 14 и Cor a 1 лесного ореха, Par j 2 постенницы и Phl p 7 тимофеевки, провести регрессионный анализ не представлялось возможным из-за слишком малого количества положительных ответов в тесте ALEX (менее шести положительных сывороток).

Таблица 3. Согласованность результатов теста ALEX и в тестах на аллергокомпоненты ImmunoCAP в «классах ALEX».
Общая согласованность классов составила 70%

 Класс
(определение ALEX)
Согласованность
(ALEX и ImmunoCAP)
0 (<0,3 kU/l) 98,9%
1 (0,3–1 kU/l) 14,9%
2 (1–5 kU/l) 36,3%
3 (5–15 kU/l) 43,9%
4 (>15 kU/l) 66,0%

Рис. 6. Тепловая карта результатов теста ALEX и тестов ImmunoCAP приведена внизу. Уровень ложноотрицательных результатов IgE-ответа на компоненты (определен как <0,3 kUA/L в тесте ALEX, но 0,3 kU/L в тестах ImmunoCAP) составил 33% (140/426) для теста ALEX. Ложноотрицательные результаты встречались во всем диапазоне измерений

В случаях с Cor a 1 и Phl p 7 количество положительных сывороток для двух систем оказалось слишком незначительным для любых значимых выводов, в то время как для Par j 2 и Cor a 14 23 из 41 образца и 13 из 40 образцов соответственно были положительными в тестах ImmunoCAP (>=0,3 kU /L). Соответствующее количество положительных образцов в тесте ALEX составило 3 как для Par j 2, так и для Cor a 14, что привело к самой низкой положительной согласованности в этом исследовании, 13 и 23% соответственно.

Из оставшегося проанализированного двадцати одного компонента для двух показана высокая согласованность результатов тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE и для двух – низкая (рис. 7, 8). В случае тестов ImmunoCAP результаты выше порогового уровня теста ALEX, то есть 0,3 kUA/L, считались положительными. Опять же количество положительных результатов в тестах ImmunoCAP могло бы быть выше в случае включения результатов от 0,1 kUA/L (отражая LoQ тестов ImmunoCAP на специфический IgE).

Анализ отрицательных результатов для экстрактов и результатов для компонентов в тестах ALEX и ImmunoCAP на примере лесного ореха

Для 25 из 64 исследованных образцов были получены положительные результаты в тесте ImmunoCAP для цельного аллергена лесного ореха, однако в тесте ALEX соответствующие результаты были отрицательными. Результаты анализа на IgE к компонентам для 24 из этих образцов приведены в табл. 4. Двадцать три сыворотки давали положительные результаты на любой из компонентов лесного ореха в тестах ImmunoCAP, в то время как в тесте ALEX было получено всего девять положительных результатов на компоненты лесного ореха.

Эти данные подчеркивают, что отрицательные результаты в тесте ALEX на экстракты не обязательно являются отрицательными на самом деле. Кроме того, они демонстрируют, что ложноотрицательные результаты исследований экстрактов не уравновешиваются положительными результатами ответа sIgE на компоненты, и сенсибилизация к определенным источникам аллергенов может быть полностью упущена.

CCD

Важно отметить, что ложноотрицательные показатели (табл. 5) не претерпели значительных изменений только при анализе сывороток, не содержащих sIgE к перекрестно-реактивным карбогидратным детерминантам, что определялось тестом ImmunoCAP на специфический IgE к MUXF3 (o214, CCD) (n=54–56).

Возможно, низкая чувствительность теста ALEX отчасти является следствием необходимости пятикратного разведения сыворотки (согласно прото-колу теста ALEX).

Пятикратное разведение образцов в тесте ALEX позволяет ингибировать CCD. Согласно информации производителя, снижение CCD-реактивности на 85% достигается благодаря этому этапу инкубации, а при увеличении времени инкубации до 30 мин CCD-реактивность умень- шается до 95% [6].

В случае ImmunoCAP ISAC нет необходимости в разведении сыворотки, и на данный момент в чипе ImmunoCAP ISAC sIgE 112 присутствуют лишь шесть CCD-содержащих компонентов из 112. Когда будет запущен новый чип ImmunoCAP ISAC E112i, в нем останется лишь четыре CCD-содержащих ал- лергенных компонента.

Результаты тестов ALEX и ImmunoCAP ISAC sIgE 112 на компоненты аллергенов

Для сравнения ALEX и ImmunoCAP ISAC sIgE 112 расчет согласованности классов был проведен двумя способами при допущении, что каждая си- стема выдает «истинные» результаты. Ложноотри- цательные результаты для ALEX относительно теста ImmunoCAP ISAC sIgE 112 были на уровне 15,8% (59/374), в то время как отрицательные результаты для ImmunoCAP ISAC sIgE 112 относительно теста ALEX составили 9,5% (33/348) (табл. 6, рис. 9).

В целом результат согласованности двух систем оказался справедливым. Общая согласованность по классам варьировала в рамках 61–97% для исследо- ванных компонентов, в подавляющем большинстве составляя свыше 80%. Наименьшая согласованность в классах 1–3 (между 19 и 51%), вероятнее всего, наблюдалась из-за низкой чувствительности теста ALEX, не превышающей значения 39 kUA/L в 407 положительных точках данных при уровне при- близительно 100 ISU-E в тесте ImmunoCAP ISAC 112 (рис. 10). Согласованность в рамках класса 4, то есть для уровня slgE выше 15 kUA/L, составила 78%.

Рис. 7 a. Корреляция между результатами тестов ALEX и ImmunoCAP на специфические IgE к аллергокомпонентам в kUA/L для Phl p 5 тимофеевки. Все данные приведены в виде логарифмической диаграммы разброса данных

Рис. 7 c. Корреляция между результатами тестов ALEX и ImmunoCAP на специфические IgE к аллергокомпонентам в kUA/L для Der p 1 D. pteronyssinus. Все данные приведены в виде логарифмической диаграммы разброса данных 

Рис. 7 b. Корреляция между результатами тестов ALEX и ImmunoCAP на специфические IgE к аллергокомпонентам в kUA/L для Phl p 5 тимофеевки. Представлены корреляции точечных данных, положительные для обеих систем и находящиеся в рамках измерительного диапазона теста ALEX (0,3–50 kUA/L) (регрессионная кривая красного цвета). 20 из 44 образцов для Phl p 5 были положительны в тестах ImmunoCAP на специфический IgE (0,3 kUA /L). В тесте ALEX значения для Phl p 5 составили 19

Рис. 7 d. Корреляция между результатами тестов ALEX и ImmunoCAP на специфические IgE к аллергокомпонентам в kUA/L для Der p 1 D. pteronyssinus. Представлены корреляции точечных данных, положительные для обеих систем и находящиеся в рамках измерительного диапазона тестаALEX (0,3–50 kUA/L) (регрессионная кривая красного цвета). 18 из 38 образцов для Der p 1 были положительны в тестах ImmunoCAP на специфический IgE (0,3 kUA /L). В тесте ALEX значения для Der p 1 составили 14

Общая чувствительность теста ALEX

Во всех сравнениях была выявлена более низкая чувствительность теста ALEX по сравнению с тестами ImmunoCAP, что отражено в уровне ложноотрицательных результатов, полученных при проведении теста ALEX (см. табл. 6).

Рис. 8 a. Корреляция между результатами тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE к аллергокомпонентам в kUA/L для Jug r 1 лесного ореха. Все данные приведены в виде логарифмической диаграммы разброса данных

Рис. 8 c. Корреляция между результатами тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE к аллергокомпонентам в kUA/L для Gal d 2 белка куриного яйца. Все данные приведены в виде логарифмической диаграммы разброса данных

Рис. 8 b. Корреляция между результатами тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE к аллергокомпонентам в kUA/L для Jug r 1 лесного ореха. Представлены корреляции точечных данных, положительные для обеих систем и находящиеся в рамках измерительного диапазона теста ALEX (0,3–50 kUA/L) (регрессионная кривая красного цвета). 19 из 42 образцов были положительными в тестах ImmunoCAP sIgE к Jug r 1 (0,3 kU /L). В тесте ALEX соответствующие значения для Jug r 1 составили 10

Рис. 8 d. Корреляция между результатами тестов ALEX и ImmunoCAP на специфический IgE к аллергокомпонентам в kUA/L для Gal d 2 белка куриного яйца. Представлены корреляции точечных данных, положительные для обеих систем и находящиеся в рамках измерительного диапазона теста ALEX (0,3–50 kUA/L) (регрессионная кривая красного цвета). 15 из 19 образцов были положительными в тестах ImmunoCAP sIgE к Gal d 2 (0,3 kU /L). В тесте ALEX соответствующие значения для Gal d 2 составили 10

Обсуждение

Согласно информации производителя, многокомпонентный тест ALEX является альтернативой широко распространенным на рынке тестам для определения уровня общего и специфических IgE ImmunoCAP и ImmunoCAP ISAC. При пря- мом сравнении технической производительности ALEX с тестами ImmunoCAP была выявлена недостаточная чувствительность теста ALEX как для цельных аллергенов (55% ложноотрицательных результатов, 234/423 положительных результатов ImmunoCAP), так и для компонентов аллергенов (33% ложноотрицательных результатов, 140/426 положительных результатов ImmunoCAP). Кроме того, динамический диапазон ALEX существенно ниже и не превышает 36 kUA/L для цельных аллергенов и 38 kUA/L для компонентов аллергенов. Уровни в тестах ImmunoCAP на специфический IgE для этих же образцов составили 100 kUA /L и до 150 kUA/L соответственно. При этом тест ALEX продемонстрировал более низкие результаты во всем динамическом диапазоне как для цельных аллергенов, так и для специфических компонентов аллергенов. В частности, при сравнении тестов ALEX и ImmunoCAP для цельных аллергенов общая согласованность классов была на уровне 53% и колебалась в промежутке 4–40% для положительных классов, варьируя от 23 до 80% согласованности положительных результа- тов для исследованных 11 экстрактов. Несколько лучшая картина наблюдалась для компонентов аллергенов: здесь общая согласованность в рамках класса составила 70%, варьируя в диапазоне 15–66% для положительных классов. Ложноотрицательные результаты, полученные при анализе ответа на экс- тракт лесного ореха, лишь подтверждают выводы, сделанные выше.

В то же время при сравнении отрицательных результатов была показана высокая согласованность ALEX и тестов ImmunoCAP на специфический IgE, составившая 99,7% для цельных аллергенов и 98,9% для компонентов аллергенов соответственно. Это свидетельствует об отсутствии очевидных проблем с фоном у теста ALEX.

Таблица 4. Сравнение результатов исследования sIgE-ответа на компоненты аллергенов на двух платформах при использовании сыворотки с отрицательным ответом на экстракт лесного ореха в тесте ALEX, но положительным в тестах ImmunoCAP на цельный аллерген

Метод Количество положительных образцов для компонентов
Метод sIgE к экстракту sIgE к любому комп. Cor a 1 Cor a 8 Cor a 9 Cor a 14
Порог 0,3 0,3 0,1 0,3 0,1 0,3 0,1 0,3 0,1 ≥ 0,3
ImmunoCAP 24 23/24 8 2 18 17 12 10 13 5
Компоненты
ALEX
0 9/24 НД 0 НД 5 НД 5 НД 0

Примечание. Показаны оба порога (0,1 и 0,3 kUA/L) для тестов ImmunoCAP на специфический IgE к компонентам аллергенов.

Таблица 5. Общая чувствительность теста ALEX

Цельные экстракты ALEX vs ImmunoCAP sIgE экстракты 55% ложноотрицательных
Компоненты аллергенов ALEX vs ImmunoCAP sIgE компоненты 33% ложноотрицательных
Компоненты аллергенов ALEX vs ImmunoCAP ISAC 112 16% ложноотрицательных
ImmunoCAP ISAC 112 vs ALEX 9,5% ложноотрицательных

Таблица 6. Согласованность между результатами теста ALEX на компоненты аллергенов и теста ImmunoCAP ISAC 112 на компоненты аллергенов (согласно «классам ALEX»)

Класс
(определение ALEX)
Согласованность ALEX
и ImmunoCAP ISAC
Согласованность ImmunoCAP
ISAC и ALEX
0 (<0,3 kU/l) 97,7% 96,0%
1 (0,3–1 kU/l) 19,3% 33,3%
2 (1–5 kU/l) 42,7% 47,0%
3 (5–15 kU/l) 51,0% 49,0%
4 (> 15 kU/l) 78,0% 65,2%

Рис. 9. Тепловые карты результатов тестов ALEX и ImmunoCAP ISAC 112. Уровень ложноотрицательных результатов для теста ALEX относительно теста ImmunoCAP ISAC 112 составил 15,8% (59/374), в то время как уровень ложноотрицательных результатов для теста ImmunoCAP ISAC 112 относительно теста ALEX составил 9,5% (33/348)

Рис. 10. Результаты уровня sIgE к компонентам аллергенов в тесте ALEX не превышают значения 39 kUA/L в 407 положи- тельных точках данных, в то время как тест ImmunoCAP ISAC 112 определяет специфический IgE приблизительно до 100 ISU-E. На графике отсутствуют тринадцать положительных точек данных (сокращены)

Таким образом, тест ALEX® tIgE, slgE к цельным аллергенам и компонентам аллергенов характеризуется низким динамическим диапазоном, слабой чувствительностью и согласованностью с однокомпонентными тестами ImmunoCAP. В сравнении с чипом ImmunoCAP ISAC sIgE 112 согласованность выше, но чувствительность и динамический диапазон все так же остаются на низком уровне.

Литература

  1. ALEX – Allergy explorer. The smart way to explore allergy. Доступно на www.macroarraydx.com.
  2. ImmunoCAP total IgE Direction for Use 52- 5292 – En/08. Доступно на https://dfu.phadia.com/Data/Pdf/5be5621c- 89c2320848d710f6.pdf.
  3. ImmunoCAP Specific IgE Direction for Use 52 – 5291 – En/09. Доступно на https://dfu.phadia.com/Data/Pd- f/5be441b889c2320848d6fb28.pdf.
  4. ImmunoCAP ISAC sIgE 112 Directions for Use 81 0002 – 62/02. Доступно на www.thermofisher.com#.
  5. Ekaterina Manuilova, Andre Schuetzenmeister, Fabian Model (2014). mcr: Method Comparison Regression. R package version 1.2.1. Available at https://CRAn.R – project.org/ package=mcr 3.
  6. ALEX – Allergy Explorer Instruction for Use. Доступно на www.macroarraydx.com.

Информация об авторах

C. Nerelius, PhD, Thermo Fisher Scientific, Phadia AB, Rapsgatan 7P, P.O. Box 6460, 751 37 Uppsala, Sweden.

E-mail: charlotte.nerelius@thermofisher.com

M. Andersson, Thermo Fisher Scientific, Phadia AB, Rapsgatan 7P, P.O. Box 6460, 751 37 Uppsala, Sweden.

E-mail: mats.andersson@thermofisher.com

L. Søgaard, Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Diagnostics ApS, CVR.nr. 27640745, Gydevang 33, 3450 Allerød.

E-mail: lone.sogaard@thermofisher.com

M. Schwanbeck, Thermo Fisher Scientific, Phadia AB, Rapsgatan 7P, P.O. Box 6460, 751 37 Uppsala, Sweden.

E-mail: maria.schwanbeck@thermofisher.com

S. Kofler, PhD: Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Diagnostics Austria GmbH, Dresdner Straße 89, 1200 Vienna, Austria.

E-mail: stefan.kofler@thermofisher.com

M. Berthold, PhD: Cyxone AB, Adelgatan 21, 211 22 Malmö, Sweden.

E-mail: malin.berthold@cyxone.com

Участие авторов

  • Концепция и дизайн исследования – Cn, MB, SK.
  • Получение результатов / оценка производительности тестов – MS, LS.
  • Статистическая обработка результатов – Cn, MB, MA.
  • Повторная статистическая обработка – Cn, MB, MA, SK.
  • Написание текста – Cn, MB, SK.
  • Редактирование – Cn, MB, SK.

Дополнительные утверждения

Авторы согласны на публикацию данной работы. Все авторы ознакомились с окончательным вариантом текста и подтвердили свое согласие на публикацию статьи. Авторы заявляют, что приведенный порядок авторов утвержден каждым из них, а также что статья не была опубликована или принята к публикации в другом журнале.

Информация об источниках финансирования

Исследование было профинансировано компанией Thermo Fisher Scientific, Immuno- Diagnostics.

Конфликт интересов

Все авторы являются (или являлись на момент подготовки текста статьи) сотрудниками компании Thermo Fisher Scientific, ImmunoDiagnostics.

up